
【醫】 dark-field microscopy
【化】 dark field
【醫】 dark field
【醫】 micrography; microscopic examination; microscopy
暗視野顯微鏡檢查(Dark-field Microscopy)是一種光學顯微技術,其原理通過特殊聚光器阻擋直射光源,僅允許物體表面散射的光線進入物鏡,從而使樣本在暗背景中呈現明亮輪廓。該技術常用于觀察未染色、透明或低對比度的生物樣本,例如螺旋體、細菌鞭毛及活體微生物運動特征。
暗視野顯微鏡采用環形光闌和抛物面聚光器,将入射光線角度調整為斜射。當光線照射樣本時,直徑小于顯微鏡分辨極限的微粒(如0.02-0.2 μm)會産生丁達爾效應,散射光線被物鏡捕獲成像。此方法突破明場顯微鏡約0.2 μm的分辨率限制,實現納米級結構的間接觀測。
優勢包括無需染色處理保持樣本活性、可實時動态觀測。局限性表現為圖像分辨率依賴散射光強度,且厚樣本易産生光暈幹擾。現代改進型號已整合數碼成像系統,支持圖像增強與定量分析(來源:Springer《先進顯微技術》第3版)。
該技術自1905年由Richard Zsigmondy完善後,持續在微生物學、材料科學領域發揮獨特作用,最新進展包括與熒光标記技術的聯用拓展(來源:Nature Methods技術綜述)。
暗視野顯微鏡檢查是一種利用特殊光學原理觀察微小樣本的技術,其核心特點是通過側向照明使樣本在暗背景下呈現明亮輪廓,從而提升分辨率。以下為詳細解釋:
暗視野顯微鏡通過中央遮光的聚光器(如抛物面聚光鏡),使光線僅從邊緣斜射到樣本,無法直接進入物鏡。樣本表面的微粒或結構因散射作用産生衍射光,進入物鏡後形成明亮影像,與黑暗背景形成強烈對比。這種設計可檢測小至4-200納米的微粒,分辨率比普通顯微鏡高約50倍。
優勢在于無需染色即可觀察活體樣本的動态,且分辨率顯著提升;局限是對樣本厚度和濃度敏感,過厚或過濃會導緻散射光重疊。
(注:更多技術細節可參考、6、8的操作指南,或、9的臨床案例。)
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