
【医】 dark-field microscopy
【化】 dark field
【医】 dark field
【医】 micrography; microscopic examination; microscopy
暗视野显微镜检查(Dark-field Microscopy)是一种光学显微技术,其原理通过特殊聚光器阻挡直射光源,仅允许物体表面散射的光线进入物镜,从而使样本在暗背景中呈现明亮轮廓。该技术常用于观察未染色、透明或低对比度的生物样本,例如螺旋体、细菌鞭毛及活体微生物运动特征。
暗视野显微镜采用环形光阑和抛物面聚光器,将入射光线角度调整为斜射。当光线照射样本时,直径小于显微镜分辨极限的微粒(如0.02-0.2 μm)会产生丁达尔效应,散射光线被物镜捕获成像。此方法突破明场显微镜约0.2 μm的分辨率限制,实现纳米级结构的间接观测。
优势包括无需染色处理保持样本活性、可实时动态观测。局限性表现为图像分辨率依赖散射光强度,且厚样本易产生光晕干扰。现代改进型号已整合数码成像系统,支持图像增强与定量分析(来源:Springer《先进显微技术》第3版)。
该技术自1905年由Richard Zsigmondy完善后,持续在微生物学、材料科学领域发挥独特作用,最新进展包括与荧光标记技术的联用拓展(来源:Nature Methods技术综述)。
暗视野显微镜检查是一种利用特殊光学原理观察微小样本的技术,其核心特点是通过侧向照明使样本在暗背景下呈现明亮轮廓,从而提升分辨率。以下为详细解释:
暗视野显微镜通过中央遮光的聚光器(如抛物面聚光镜),使光线仅从边缘斜射到样本,无法直接进入物镜。样本表面的微粒或结构因散射作用产生衍射光,进入物镜后形成明亮影像,与黑暗背景形成强烈对比。这种设计可检测小至4-200纳米的微粒,分辨率比普通显微镜高约50倍。
优势在于无需染色即可观察活体样本的动态,且分辨率显著提升;局限是对样本厚度和浓度敏感,过厚或过浓会导致散射光重叠。
(注:更多技术细节可参考、6、8的操作指南,或、9的临床案例。)
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