
【化】 differential centrifugation
差速離心(Differential Centrifugation)是一種基于物質物理特性差異進行分離的實驗室技術,廣泛應用于生物學、生物化學領域。其英文術語"differential centrifugation"直接反映了通過差異沉降實現分離的核心原理。
該技術主要通過控制離心機轉速與離心時間,利用細胞組分間的密度梯度差異實現分層分離。較大密度的顆粒(如細胞核)在較低速離心時率先沉澱,而較小密度的組分(如微粒體)需要更高轉速才能沉降。标準操作流程包含四個關鍵階段:
在生物醫學研究中,該技術被證實能有效分離線粒體、溶酶體等細胞器,為蛋白質組學研究提供基礎樣本。根據《分子生物學技術手冊》記載,成功實施差速離心需精确控制離心介質滲透壓,并建議結合蔗糖密度梯度離心進行二次純化。
參考文獻
差速離心是一種基于顆粒大小和密度差異的分離技術,通過逐步增加離心力實現不同組分的分級沉降。以下是其詳細解析:
定義與基本原理
差速離心利用顆粒的沉降系數差異,通過多次離心步驟分離混合物。較大或密度較高的顆粒在較低離心力下優先沉降,剩餘上清液再以更高轉速處理較小顆粒。公式推導中,離心力$F=Mω²r$與顆粒質量(M)、角速度(ω)和旋轉半徑(r)相關,沉降速度$dr/dt$與顆粒體積(V)、密度差(D-D')成正比,與摩擦系數(f)成反比。
操作步驟
應用與限制
與密度梯度離心的區别
|對比項 | 差速離心 | 密度梯度離心 |
|------------------|----------------------------|----------------------------|
|原理 | 依賴顆粒沉降速度差異 | 依賴顆粒密度差異 |
|離心次數 | 多次不同轉速離心 | 單次離心(梯度介質中沉降)|
|分離精度 | 適用于差異大的組分 | 可分離密度相近的顆粒 |
該方法在細胞生物學和生物化學中廣泛應用,但需結合後續純化步驟以提高組分純度。
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