免疫印迹英文解釋翻譯、免疫印迹的近義詞、反義詞、例句
英語翻譯:
【化】 immunoblotting
分詞翻譯:
免疫的英語翻譯:
immunity; immunization
【醫】 immunity
印迹的英語翻譯:
print
【化】 blotting
【醫】 engram
專業解析
免疫印迹(Immunoblotting),通常特指Western Blotting(蛋白質印迹),是一種廣泛應用于分子生物學、生物化學和醫學研究領域的實驗技術,主要用于檢測複雜生物樣品中特定蛋白質的存在、相對含量、分子量大小以及翻譯後修飾狀态。
從漢英詞典角度解析:
- 免疫 (Miǎnyì): 對應英文"Immune"。指該技術利用抗原-抗體特異性結合反應的免疫學原理。
- 印迹 (Yìnjì): 對應英文"Blotting" 或"Blot"。指将分離後的生物大分子(此處為蛋白質)從凝膠轉移到固相支持膜(如硝酸纖維素膜或PVDF膜)上的過程,形象地比喻為将分子“印記”在膜上。
詳細技術原理與步驟:
-
蛋白質分離 (Protein Separation):
- 首先,含有目标蛋白質的複雜樣品(如細胞裂解液、組織勻漿液)通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE) 進行分離。
- SDS使蛋白質變性并帶上均勻負電荷,在電場作用下,蛋白質主要根據其分子量大小在凝膠中遷移,小分子量蛋白遷移快,大分子量蛋白遷移慢,從而實現分離。
-
轉印 (Transfer/Blotting):
- 将SDS-PAGE凝膠中分離好的蛋白質條帶,通過電轉印或毛細作用轉印到固相膜(通常是硝酸纖維素膜或PVDF膜)上。
- 此步驟是将凝膠中的蛋白質“印迹”到膜上,便于後續的抗體雜交操作,并提高檢測的靈敏度和特異性。
-
封閉 (Blocking):
- 轉印後,膜上未結合蛋白質的區域需要被封閉(常用脫脂奶粉或牛血清白蛋白BSA溶液),以防止後續步驟中抗體非特異性結合到膜上,降低背景噪音。
-
一抗孵育 (Primary Antibody Incubation):
- 加入針對目标蛋白質(抗原)的特異性一抗 (Primary Antibody)。一抗與膜上的目标蛋白質特異性結合。
- 這是“免疫”反應的核心步驟,體現了抗原-抗體的高度特異性識别。
-
二抗孵育 (Secondary Antibody Incubation):
- 洗去未結合的一抗後,加入标記有報告分子(如辣根過氧化物酶HRP、堿性磷酸酶AP或熒光基團)的二抗 (Secondary Antibody)。
- 二抗能特異性識别并結合一抗(例如,如果一抗是兔源的,則使用抗兔的二抗)。二抗上的标記物用于後續的信號檢測。
-
檢測 (Detection):
- 洗去未結合的二抗後,根據二抗标記的報告分子選擇相應的檢測方法:
- 酶标記 (HRP/AP): 加入底物(如ECL化學發光底物、NBT/BCIP顯色底物),産生可檢測的化學發光信號或顔色沉澱。
- 熒光标記: 使用熒光掃描儀直接檢測熒光信號。
- 最終在膜的相應位置顯示出代表目标蛋白質的條帶信號。
核心應用:
- 檢測特定蛋白質的表達: 确認某種蛋白質在特定細胞、組織或條件下是否存在及其表達水平高低。
- 确定蛋白質分子量: 通過與已知分子量标準品(Marker)對比,估算目标蛋白質的分子量。
- 分析蛋白質翻譯後修飾: 如磷酸化、糖基化等(常需使用修飾特異性抗體)。
- 抗體特異性驗證: 驗證抗體是否能特異性識别目标蛋白。
- 疾病診斷與生物标志物研究: 在臨床檢驗和基礎研究中用于檢測疾病相關蛋白。
免疫印迹(Western Blotting)是一種結合了凝膠電泳分離蛋白質的能力和抗原-抗體特異性免疫反應的高靈敏度檢測技術。其名稱“免疫印迹”精确地概括了該技術的兩個關鍵特征:“免疫”指依賴抗體進行特異性識别,“印迹”指将蛋白質從凝膠轉移到固相膜的過程。它是生命科學研究中不可或缺的蛋白質分析工具。
權威參考來源:
- 《分子克隆實驗指南》(Molecular Cloning: A Laboratory Manual) - 被譽為分子生物學領域的“聖經”,詳細闡述了Western Blotting的原理和标準操作流程。 (來源: Cold Spring Harbor Laboratory Press)
- 美國國立衛生研究院 (NIH) - National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) - 其官方網站或相關研究部門常提供标準的實驗技術方案,包括Western Blotting。 (來源: https://www.nichd.nih.gov)
- 《蛋白質技術手冊》(The Protein Protocols Handbook) - 專注于蛋白質研究技術的實用手冊,包含Western Blotting的詳細步驟和優化方案。 (來源: Springer Nature)
- 生物通 (Bioon) 或生物谷 (Bioon) - 國内知名的生命科學門戶網站,提供技術專題、實驗方法庫,包含Western Blotting的原理介紹和常見問題解答。 (來源: Bioon.com / Bioon.com.cn)
網絡擴展解釋
免疫印迹(Western blotting)是一種結合凝膠電泳與抗體特異性結合的蛋白質檢測技術,主要用于鑒定特定蛋白質的存在、分子量及半定量分析。以下是其核心内容的綜合解釋:
1.定義與原理
- 定義:免疫印迹又稱蛋白質印迹(Western blotting),通過抗原-抗體特異性反應檢測複雜樣本中的目标蛋白。其結合了SDS-PAGE電泳的高分辨力與固相免疫的高靈敏度。
- 原理:利用電泳分離蛋白質後,将蛋白轉移到固相膜(如硝酸纖維素膜),再依次與一抗、标記二抗結合,最終通過顯色或熒光信號檢測目标蛋白。
2.主要步驟
- 電泳分離:使用SDS-PAGE将蛋白質按分子量分離。
- 轉膜:将分離的蛋白質轉移到固相膜上,便于後續抗體反應。
- 封閉:用牛血清蛋白或脫脂奶粉封閉膜上的非特異性結合位點。
- 抗體孵育:先用特異性一抗識别目标蛋白,再用酶或熒光标記的二抗結合一抗。
- 信號檢測:通過化學發光或顯色底物顯示目标蛋白條帶。
3.技術特點
- 高特異性:抗體僅與目标蛋白結合,減少交叉反應。
- 靈敏度高:可檢測低至皮克(pg)級别的蛋白。
- 半定量分析:通過條帶灰度值對比估算蛋白表達量。
4.應用領域
- 疾病診斷:如HIV抗體檢測、自身免疫病标志物分析。
- 基礎研究:分析基因表達産物、蛋白質修飾及相互作用。
- 藥物開發:驗證藥物對靶蛋白的影響,或制備特異性抗體用于疫苗研發。
補充說明
- 與Southern/Northern blot的區别:免疫印迹針對蛋白質,後兩者分别檢測DNA和RNA。
- 術語統一性:免疫印迹與Western blotting(WB)為同一技術,無本質區别。
如需更詳細的實驗操作或案例,來源。
分類
ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ
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