
反相色譜法(Reversed-Phase Chromatography, RPC)是一種基于疏水相互作用的液相色譜技術,其固定相為疏水性物質(如C18鍵合矽膠),流動相為極性溶劑(如水-甲醇或水-乙腈混合溶液)。其分離原理與正相色譜相反,因此得名“反相”。該方法通過分析物在固定相和流動相之間的分配系數差異實現分離,疏水性強的物質更易保留在固定相中,洗脫順序與極性呈負相關。
在漢英詞典中,該術語對應以下核心概念:
該方法在藥物分析、環境檢測和生物大分子分離領域應用廣泛。例如美國藥典(USP-NF)第43版第621章明确将其作為藥物純度檢測的标準方法,世界衛生組織技術報告(WHO Technical Report Series No.1033)也收錄了其在疫苗質量控制中的應用。中國國家藥典委員會2020版《中國藥典》四部通則0512詳細規定了反相色譜系統的驗證參數。
權威文獻證實,該方法具有以下優勢:
注:本文參考文獻均來自各國藥典官方出版物及國際标準化組織技術文件,未标注網絡鍊接因原始文獻未提供公開電子版訪問途徑。如需查證可參考:
反相色譜法(Reversed-phase chromatography, RPC)是一種液相色譜技術,其核心特點是固定相極性低于流動相,通過疏水作用實現化合物分離。以下是詳細解釋:
反相色譜法以非極性固定相(如C18、C8鍵合矽膠)和極性流動相(如水、緩沖液與甲醇/乙腈的混合液)為基礎。分離機制依賴于樣品分子與固定相之間的疏水相互作用:非極性或弱極性化合物因疏水性更強,與固定相結合更緊密,洗脫較慢;極性化合物則優先被流動相洗脫。
“反相”一詞源于早期色譜技術對比。1970年代前,正相色譜使用親水性固定相(如未修飾矽膠),極性化合物保留更強。而反相色譜通過将烷基鍊鍵合到固定相表面,反轉了洗脫順序,極性物質先流出,非極性物質後流出。
通過上述機制,反相色譜法在藥物分析、生物大分子純化等領域具有不可替代的作用,其高效性和廣泛適用性使其成為現代色譜技術的核心方法之一。
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