
【建】 linked enzyme assay
【化】 ligase
【醫】 analytical method
連接酶分析法(Ligase Detection Method)是一種基于DNA連接酶特異性催化作用的分子檢測技術。從漢英詞典角度解析,"連接酶"對應英文"ligase"(來源:《英漢生物化學詞典》,"分析法"譯為"detection method",整體可表述為"a nucleic acid amplification technique utilizing ligase enzymatic activity"(來源:美國國立生物技術信息中心術語庫。
該方法的核心原理是:當兩個特異性探針與靶DNA完全互補配對時,DNA連接酶可将二者共價連接,通過檢測連接産物實現靶序列的定性或定量分析。其技術優勢體現在:
臨床應用主要涵蓋腫瘤基因分型(如KRAS突變檢測和遺傳病診斷(囊性纖維化CFTR基因篩查。實驗流程包含探針設計、連接反應、産物檢測三個關鍵階段,需嚴格控制退火溫度和時間參數(《臨床分子診斷技術》2023版。
當前技術改進聚焦于:①連接酶熱穩定性提升 ②微流控芯片集成化 ③數字化信號讀取(Nature Methods 2024年綜述。研究顯示,新一代連接酶分析法檢測限可達0.1%突變等位基因頻率(Journal of Molecular Diagnostics, 2025。
連接酶分析法是一種基于連接酶催化特性的生物化學檢測方法,主要用于檢測特定分子(如蛋白質、核酸)的存在或進行定量分析。以下是詳細解釋:
核心機制
利用連接酶催化兩個分子形成共價鍵的能力,結合其他生物識别元件(如抗原-抗體、互補核酸序列)實現目标物的特異性檢測。例如,在免疫分析中,連接酶可能與抗體偶聯,通過酶促顯色反應放大信號。
信號放大
通過酶與底物的反應(如顯色、熒光)将微量目标物轉化為可檢測信號,提升靈敏度。例如,ELISA(酶聯免疫吸附試驗)即屬于此類。
連接酶免疫分析法
核酸連接酶分析
如需更詳細的技術流程或具體實驗方案,可參考相關文獻或專業檢測試劑盒說明。
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