
【建】 linked enzyme assay
【化】 ligase
【医】 analytical method
连接酶分析法(Ligase Detection Method)是一种基于DNA连接酶特异性催化作用的分子检测技术。从汉英词典角度解析,"连接酶"对应英文"ligase"(来源:《英汉生物化学词典》,"分析法"译为"detection method",整体可表述为"a nucleic acid amplification technique utilizing ligase enzymatic activity"(来源:美国国立生物技术信息中心术语库。
该方法的核心原理是:当两个特异性探针与靶DNA完全互补配对时,DNA连接酶可将二者共价连接,通过检测连接产物实现靶序列的定性或定量分析。其技术优势体现在:
临床应用主要涵盖肿瘤基因分型(如KRAS突变检测和遗传病诊断(囊性纤维化CFTR基因筛查。实验流程包含探针设计、连接反应、产物检测三个关键阶段,需严格控制退火温度和时间参数(《临床分子诊断技术》2023版。
当前技术改进聚焦于:①连接酶热稳定性提升 ②微流控芯片集成化 ③数字化信号读取(Nature Methods 2024年综述。研究显示,新一代连接酶分析法检测限可达0.1%突变等位基因频率(Journal of Molecular Diagnostics, 2025。
连接酶分析法是一种基于连接酶催化特性的生物化学检测方法,主要用于检测特定分子(如蛋白质、核酸)的存在或进行定量分析。以下是详细解释:
核心机制
利用连接酶催化两个分子形成共价键的能力,结合其他生物识别元件(如抗原-抗体、互补核酸序列)实现目标物的特异性检测。例如,在免疫分析中,连接酶可能与抗体偶联,通过酶促显色反应放大信号。
信号放大
通过酶与底物的反应(如显色、荧光)将微量目标物转化为可检测信号,提升灵敏度。例如,ELISA(酶联免疫吸附试验)即属于此类。
连接酶免疫分析法
核酸连接酶分析
如需更详细的技术流程或具体实验方案,可参考相关文献或专业检测试剂盒说明。
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