免疫印迹法英文解释翻译、免疫印迹法的近义词、反义词、例句

英语翻译：

【化】 immunoblotting

分词翻译：

免疫的英语翻译：

immunity; immunization
【医】 immunity

印迹的英语翻译：

print
【化】 blotting
【医】 engram

法的英语翻译：

dharma; divisor; follow; law; standard
【医】 method
【经】 law

专业解析

免疫印迹法（Western Blot），又称蛋白质印迹法（Western Blotting），是一种广泛应用于分子生物学、生物化学和医学研究领域的实验技术，主要用于检测复杂生物样品中特定蛋白质的存在、相对含量及分子量大小。其名称“Western”是相对于检测DNA的“Southern Blotting”（Southern印迹法）和检测RNA的“Northern Blotting”（Northern印迹法）而来，体现了术语的沿革。

技术原理与核心步骤：

蛋白质分离（Separation by Electrophoresis）：样品中的蛋白质混合物首先通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分离。SDS使蛋白质变性并带上负电荷，在电场作用下，蛋白质主要依据分子量大小在凝胶中迁移，小分子量蛋白质迁移速度快，大分子量蛋白质迁移速度慢，从而实现分离。
转膜（Transfer to Membrane）：将凝胶中分离好的蛋白质条带通过电转印或毛细作用转移到固相支持物（通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。此步骤旨在将蛋白质从凝胶固定到膜上，便于后续的抗体杂交操作。
封闭（Blocking）：转膜后，用非特异性蛋白质溶液（如脱脂奶粉或牛血清白蛋白BSA）封闭膜上未结合蛋白质的空隙位点。这一步至关重要，可防止后续步骤中抗体非特异性结合到膜上，降低背景噪音。
一抗孵育（Primary Antibody Incubation）：加入针对目标蛋白质（抗原）的特异性一抗（Primary Antibody）。一抗与膜上的目标蛋白质特异性结合。孵育后洗去未结合的一抗。
二抗孵育（Secondary Antibody Incubation）：加入与一抗种属来源相匹配的、偶联有报告酶（如辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP）的二抗（Secondary Antibody）。二抗能特异性识别并结合一抗。孵育后洗去未结合的二抗。
检测（Detection）：加入该报告酶对应的底物。在酶的作用下，底物发生化学反应，产生可检测的信号。常用的检测方法包括：
- 化学发光法（Chemiluminescence）：底物反应产生光信号，通过X光胶片或成像系统捕获。
- 显色法（Chromogenic Detection）：底物反应产生有色沉淀，肉眼或扫描仪可见。
- 荧光法（Fluorescence Detection）：使用偶联荧光基团的二抗，通过荧光扫描仪检测。

核心价值与应用：

免疫印迹法因其特异性高（依赖于抗原-抗体特异性结合）、灵敏度高（通过信号放大系统）和能提供分子量信息等优点，成为生命科学研究中不可或缺的工具，主要用于：

特定蛋白质的检测与鉴定：确认样品中是否存在目标蛋白质。
蛋白质表达水平的半定量分析：通过比较条带信号的强弱，分析目标蛋白质在不同样品（如正常与病变组织、处理与未处理细胞）中的相对表达量变化。
蛋白质分子量测定：通过与已知分子量标准品（Marker）对比，估算目标蛋白质的分子量，也可用于检测蛋白质翻译后修饰（如糖基化、磷酸化）引起的分子量变化。
抗体特异性验证：验证新制备或购买的抗体是否能特异性识别目标蛋白质。

权威参考文献来源：

《分子克隆实验指南》（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）：由冷泉港实验室出版社出版，被誉为分子生物学领域的“圣经”，详细阐述了包括Western Blot在内的各种基础分子生物学技术原理与操作步骤。来源：Cold Spring Harbor Laboratory Press.
《抗体技术实验指南》（Using Antibodies: A Laboratory Manual）：同样由冷泉港实验室出版社出版，专注于抗体相关技术，对免疫印迹法的优化和问题解决有深入指导。来源：Cold Spring Harbor Laboratory Press.
《自然实验手册》（Nature Protocols）：国际顶级期刊《自然》（Nature）旗下的在线实验方法库，提供大量经过同行评议的、详细的Western Blot实验方案。来源：Nature Portfolio.
《生物化学与分子生物学方法》（Methods in Biochemistry and Molecular Biology）：专业丛书系列，收录众多权威学者撰写的特定技术方法章节，包括免疫印迹法。来源：Springer Nature / Academic Press.
美国国立卫生研究院（NIH）相关技术资源：NIH下属机构（如NCI, NIAID等）的官方网站常提供标准化的实验操作规程（SOP），包含Western Blot。来源：National Institutes of Health (NIH).

网络扩展解释

免疫印迹法（Western blotting）是一种结合凝胶电泳与免疫化学技术的蛋白质检测方法，具有高分辨率、高特异性和敏感性。以下从原理、步骤、应用和特点等方面综合解释：

定义与原理

免疫印迹法通过电泳分离蛋白质，再将其转移到固相膜（如硝酸纤维素膜），利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过标记的二抗和显色底物对目标蛋白进行定位分析。其核心是将高分辨率的SDS-PAGE电泳与免疫检测相结合，实现对复杂样品中特定蛋白质的定性和半定量分析。

操作步骤

SDS-PAGE电泳：
蛋白质样本经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中按分子量大小分离，分子量越小迁移越快。此阶段分离结果需染色后才能肉眼观察（如考马斯亮蓝染色）。
电转移：
将凝胶中分离的蛋白质条带转移至固相膜（如硝酸纤维素膜），通常使用低电压（100V）、大电流（1~2A）进行45分钟转移，确保蛋白质固定于膜上。
酶免疫定位：
依次用特异性一抗和酶标记二抗（如HRP标记抗体）孵育膜，最后加入显色底物（如3,3-二氨基联苯胺或4-氯-1-萘酚）使目标蛋白条带显色，通过条带位置和强度判断结果。

主要应用

医学诊断：检测病毒抗体（如HIV）、自身免疫疾病标志物（如系统性红斑狼疮的抗核抗体）。
基础研究：分析蛋白质表达水平、分子量测定及翻译后修饰研究。
生物技术：验证基因工程产物的蛋白表达（如重组蛋白）。

优缺点

优点：特异性强、灵敏度高（可检测低至pg级蛋白）、可同时分析多个样本。
局限性：操作步骤繁琐、耗时较长，且对抗体质量要求较高。

扩展知识

免疫印迹法名称源于Southern blot（DNA印迹），后衍生出Northern blot（RNA印迹）和Western blot（蛋白质印迹），形成分子生物学“三大印迹技术”。

如需更详细的技术参数或具体实验案例，可参考来源网页（如）。