western blot是什麼意思，western blot的意思翻譯、用法、同義詞、例句
常用詞典
蛋白質印迹
例句
Cell lysates were collected for Western blot analysis.
收集到的細胞溶解液均進行免疫印迹分析。
The eluted sample can then be analyzed by western blot.
稀釋的樣品可以隨後用于western blot分析。
Western blot showed the good immunological specificity of the IgY.
經免疫印迹分析，具有良好的免疫學特異性。
Western Blot assay shows the purified antibody have higher specificity.
實驗表明純化後的抗體具有較高特異性。
Western blot analysis of extracts of various cell lines using TACE Antibody.
使用TACE抗體對多種細胞提取物進行western blot分析。
專業解析
Western blot（蛋白質印迹法）是一種廣泛應用于分子生物學、生物化學和醫學研究領域的實驗技術，主要用于檢測複雜生物樣品中特定蛋白質的存在、相對含量及其分子量大小。其名稱源自與它類似的技術Southern blot（DNA印迹法）和Northern blot（RNA印迹法），因其檢測對象是蛋白質而得名。
Western blot的基本原理和步驟：
- 蛋白質提取與定量： 從細胞或組織樣本中提取總蛋白質，并測定其濃度，确保後續上樣量一緻。
- SDS-PAGE凝膠電泳： 将蛋白質樣品與含有十二烷基硫酸鈉（SDS）和還原劑（如β-巯基乙醇）的上樣緩沖液混合。SDS使蛋白質變性并帶上均勻的負電荷，還原劑破壞二硫鍵。隨後，樣品被加載到聚丙烯酰胺凝膠（通常為SDS-PAGE凝膠）的加樣孔中。在電場作用下，蛋白質根據其分子量大小在凝膠中遷移分離，分子量小的蛋白質遷移得快，分子量大的遷移得慢。
- 轉膜： 電泳結束後，将凝膠中分離的蛋白質條帶轉移到固相支持膜上（常用硝酸纖維素膜或PVDF膜）。這個過程稱為“印迹”（blotting），通常采用電轉印法完成，利用電場将凝膠中的蛋白質轉移到膜上。轉膜的方向是蛋白質從凝膠向膜移動。
- 封閉： 轉膜後的膜上存在大量非特異性蛋白質結合位點。為了防止後續步驟中抗體非特異性結合到膜上造成背景信號，需要用封閉液（通常含有牛血清白蛋白、脫脂奶粉或酪蛋白）孵育膜，封閉這些位點。
- 一抗孵育： 将膜與針對目标蛋白質的特異性一抗（Primary Antibody）一起孵育。一抗能特異性識别并結合目标蛋白質（抗原）。
- 洗滌： 洗去未結合的一抗，減少背景。
- 二抗孵育： 将膜與帶有标記物的二抗（Secondary Antibody）一起孵育。二抗能特異性識别并結合一抗（例如，如果一抗是兔源的，則二抗是抗兔的）。二抗上通常連接有酶（如辣根過氧化物酶-HRP或堿性磷酸酶-AP）或熒光基團。
- 洗滌： 再次洗去未結合的二抗。
- 檢測： 根據二抗标記物的不同，采用相應的檢測方法：
- 酶标二抗： 加入顯色底物（如HRP的底物DAB或ECL化學發光底物），酶催化底物反應産生可見的顔色沉澱或化學發光信號。化學發光法因其高靈敏度和寬動态範圍而最常用，信號可通過X光膠片或化學發光成像儀捕獲。
- 熒光标記二抗： 使用熒光掃描儀直接檢測膜上的熒光信號。
Western blot的主要應用：
- 檢測特定蛋白質的表達： 确定某種蛋白質在特定細胞、組織或處理條件下是否存在及其表達水平。
- 蛋白質定量（半定量）： 通過與内參蛋白（如β-actin, GAPDH, Tubulin等）的信號強度比較，可以相對定量目标蛋白的表達量變化。
- 确定蛋白質分子量： 通過與已知分子量的蛋白質标準品（Marker）比較，可以估算目标蛋白的分子量。
- 分析蛋白質翻譯後修飾： 如磷酸化、糖基化等（常需使用修飾特異性的抗體）。
- 診斷應用： 例如，在HIV感染診斷中，Western blot曾被用作确證試驗（現已被其他方法取代），也用于檢測某些自身免疫性疾病相關的自身抗體。
參考文獻：
網絡擴展資料
Western Blot（蛋白質印迹法）是一種廣泛應用于分子生物學和生物化學領域的實驗技術，主要用于檢測特定蛋白質的表達及分析其特性。以下是詳細解釋：
一、定義與起源
Western Blot由Harry Towbin于1979年提出，其名稱源自類似技術Southern Blot（DNA檢測）和Northern Blot（RNA檢測）的命名邏輯。它通過凝膠電泳分離蛋白質，再結合抗體特異性識别目标蛋白，實現高靈敏度檢測。
二、基本原理
- 蛋白質分離：利用SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）按分子量大小分離蛋白質。
- 轉膜：将分離的蛋白質轉移到固相載體（如硝酸纖維素膜或PVDF膜）上，保持其生物活性。
- 抗體結合：一抗與目标蛋白特異性結合，二抗（标記酶或熒光物質）與一抗結合，通過顯色或發光信號檢測目标蛋白。
三、實驗關鍵步驟
- 樣品制備：提取細胞或組織中的蛋白質，并進行定量和變性處理。
- 電泳與轉膜：通過SDS-PAGE分離蛋白質并轉移至膜上。
- 封閉與孵育：用封閉液減少非特異性結合，依次加入一抗和二抗。
- 信號檢測：根據标記方法（如化學發光、熒光或顯色底物）分析目标條帶。
四、應用領域
- 基礎研究：分析基因在蛋白質水平的表達。
- 疾病診斷：檢測病原體相關蛋白（如HIV抗體）。
- 藥物開發：評估藥物對目标蛋白的影響。
五、注意事項
- 内參蛋白：需使用管家蛋白（如β-actin）作為上樣量參照，确保結果可比性。
- 抗體特異性：選擇經過驗證的一抗以避免假陽性。
- 實驗對照：設置陽性/陰性對照以排除幹擾。
通過上述流程，Western Blot可實現低至1 ng級别蛋白質的檢測，是蛋白質研究的重要工具。
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