western blot是什么意思，western blot的意思翻译、用法、同义词、例句
常用词典
蛋白质印迹
例句
Cell lysates were collected for Western blot analysis.
收集到的细胞溶解液均进行免疫印迹分析。
The eluted sample can then be analyzed by western blot.
稀释的样品可以随后用于western blot分析。
Western blot showed the good immunological specificity of the IgY.
经免疫印迹分析，具有良好的免疫学特异性。
Western Blot assay shows the purified antibody have higher specificity.
实验表明纯化后的抗体具有较高特异性。
Western blot analysis of extracts of various cell lines using TACE Antibody.
使用TACE抗体对多种细胞提取物进行western blot分析。
专业解析
Western blot（蛋白质印迹法）是一种广泛应用于分子生物学、生物化学和医学研究领域的实验技术，主要用于检测复杂生物样品中特定蛋白质的存在、相对含量及其分子量大小。其名称源自与它类似的技术Southern blot（DNA印迹法）和Northern blot（RNA印迹法），因其检测对象是蛋白质而得名。
Western blot的基本原理和步骤：
- 蛋白质提取与定量： 从细胞或组织样本中提取总蛋白质，并测定其浓度，确保后续上样量一致。
- SDS-PAGE凝胶电泳： 将蛋白质样品与含有十二烷基硫酸钠（SDS）和还原剂（如β-巯基乙醇）的上样缓冲液混合。SDS使蛋白质变性并带上均匀的负电荷，还原剂破坏二硫键。随后，样品被加载到聚丙烯酰胺凝胶（通常为SDS-PAGE凝胶）的加样孔中。在电场作用下，蛋白质根据其分子量大小在凝胶中迁移分离，分子量小的蛋白质迁移得快，分子量大的迁移得慢。
- 转膜： 电泳结束后，将凝胶中分离的蛋白质条带转移到固相支持膜上（常用硝酸纤维素膜或PVDF膜）。这个过程称为“印迹”（blotting），通常采用电转印法完成，利用电场将凝胶中的蛋白质转移到膜上。转膜的方向是蛋白质从凝胶向膜移动。
- 封闭： 转膜后的膜上存在大量非特异性蛋白质结合位点。为了防止后续步骤中抗体非特异性结合到膜上造成背景信号，需要用封闭液（通常含有牛血清白蛋白、脱脂奶粉或酪蛋白）孵育膜，封闭这些位点。
- 一抗孵育： 将膜与针对目标蛋白质的特异性一抗（Primary Antibody）一起孵育。一抗能特异性识别并结合目标蛋白质（抗原）。
- 洗涤： 洗去未结合的一抗，减少背景。
- 二抗孵育： 将膜与带有标记物的二抗（Secondary Antibody）一起孵育。二抗能特异性识别并结合一抗（例如，如果一抗是兔源的，则二抗是抗兔的）。二抗上通常连接有酶（如辣根过氧化物酶-HRP或碱性磷酸酶-AP）或荧光基团。
- 洗涤： 再次洗去未结合的二抗。
- 检测： 根据二抗标记物的不同，采用相应的检测方法：
- 酶标二抗： 加入显色底物（如HRP的底物DAB或ECL化学发光底物），酶催化底物反应产生可见的颜色沉淀或化学发光信号。化学发光法因其高灵敏度和宽动态范围而最常用，信号可通过X光胶片或化学发光成像仪捕获。
- 荧光标记二抗： 使用荧光扫描仪直接检测膜上的荧光信号。
Western blot的主要应用：
- 检测特定蛋白质的表达： 确定某种蛋白质在特定细胞、组织或处理条件下是否存在及其表达水平。
- 蛋白质定量（半定量）： 通过与内参蛋白（如β-actin, GAPDH, Tubulin等）的信号强度比较，可以相对定量目标蛋白的表达量变化。
- 确定蛋白质分子量： 通过与已知分子量的蛋白质标准品（Marker）比较，可以估算目标蛋白的分子量。
- 分析蛋白质翻译后修饰： 如磷酸化、糖基化等（常需使用修饰特异性的抗体）。
- 诊断应用： 例如，在HIV感染诊断中，Western blot曾被用作确证试验（现已被其他方法取代），也用于检测某些自身免疫性疾病相关的自身抗体。
参考文献：
网络扩展资料
Western Blot（蛋白质印迹法）是一种广泛应用于分子生物学和生物化学领域的实验技术，主要用于检测特定蛋白质的表达及分析其特性。以下是详细解释：
一、定义与起源
Western Blot由Harry Towbin于1979年提出，其名称源自类似技术Southern Blot（DNA检测）和Northern Blot（RNA检测）的命名逻辑。它通过凝胶电泳分离蛋白质，再结合抗体特异性识别目标蛋白，实现高灵敏度检测。
二、基本原理
- 蛋白质分离：利用SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）按分子量大小分离蛋白质。
- 转膜：将分离的蛋白质转移到固相载体（如硝酸纤维素膜或PVDF膜）上，保持其生物活性。
- 抗体结合：一抗与目标蛋白特异性结合，二抗（标记酶或荧光物质）与一抗结合，通过显色或发光信号检测目标蛋白。
三、实验关键步骤
- 样品制备：提取细胞或组织中的蛋白质，并进行定量和变性处理。
- 电泳与转膜：通过SDS-PAGE分离蛋白质并转移至膜上。
- 封闭与孵育：用封闭液减少非特异性结合，依次加入一抗和二抗。
- 信号检测：根据标记方法（如化学发光、荧光或显色底物）分析目标条带。
四、应用领域
- 基础研究：分析基因在蛋白质水平的表达。
- 疾病诊断：检测病原体相关蛋白（如HIV抗体）。
- 药物开发：评估药物对目标蛋白的影响。
五、注意事项
- 内参蛋白：需使用管家蛋白（如β-actin）作为上样量参照，确保结果可比性。
- 抗体特异性：选择经过验证的一抗以避免假阳性。
- 实验对照：设置阳性/阴性对照以排除干扰。
通过上述流程，Western Blot可实现低至1 ng级别蛋白质的检测，是蛋白质研究的重要工具。
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