
n. 顯微熒光光度法
microfluorophotometry(顯微熒光光度測定法)是一種結合了顯微鏡技術和熒光光度測定法的精密分析技術,主要用于定量測量極微量樣本(如單個細胞或亞細胞結構)中的熒光物質濃度或活性。其核心原理是通過顯微鏡聚焦激發光到微小區域,激發樣本中的熒光物質發出熒光,再通過高靈敏度的光度檢測系統測量熒光的強度,從而實現對微量目标物的精确定量分析。
顯微熒光定位
利用顯微鏡的高分辨率光學系統,将特定波長的激發光精确聚焦到樣本的微觀區域(如細胞器),激發熒光标記物(如熒光染料、熒光抗體或天然熒光物質)發射熒光。該技術能實現空間定位檢測,適用于活細胞或固定樣本。
光度定量分析
通過光電倍增管(PMT)或CCD探測器測量發射熒光的強度,結合标準曲線或參比物質,計算出目标物的絕對濃度或相對活性。靈敏度可達(10^{-18})摩爾級别,適用于酶活性、離子濃度(如(Ca^{2+}))、基因表達等研究。
核心應用領域
高靈敏度(檢測限低)、空間分辨率(微米級)、可實時動态監測活樣本。
需精密光學校準,易受背景熒光幹擾;樣本制備要求高(如熒光标記效率影響準确性)。
Herman, B. (1998). Fluorescence Microscopy. 2nd ed. Springer. (顯微熒光技術基礎)
Lipp, P. et al. (2000). "Microfluorophotometry of intracellular Ca²⁺ in cardiac myocytes." Journal of Physiology. (心肌細胞鈣離子測定)
Inoué, S. (2006). "Foundations of confocal microfluorophotometry." Methods in Cell Biology. (共聚焦顯微熒光光度法優化)
注:文獻來源為經典學術著作與期刊,鍊接因平台限制未提供,可通過DOI在學術數據庫(如PubMed、Google Scholar)檢索原文。
microfluorophotometry 是結合顯微技術、熒光檢測和光度測定的分析方法,主要用于定量檢測微小樣本(如細胞、組織)中的熒光物質。以下是詳細解釋:
通過顯微鏡觀察樣本,利用特定波長的光激發熒光物質,再通過光電檢測器測量發射光的強度,從而定量分析目标物質的濃度或分布。例如,在生物學中可用于檢測細胞内的DNA、蛋白質或特定标記物。
如需進一步了解技術細節或案例,可參考相關文獻或專業儀器說明。
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