
n. 显微荧光光度法
microfluorophotometry(显微荧光光度测定法)是一种结合了显微镜技术和荧光光度测定法的精密分析技术,主要用于定量测量极微量样本(如单个细胞或亚细胞结构)中的荧光物质浓度或活性。其核心原理是通过显微镜聚焦激发光到微小区域,激发样本中的荧光物质发出荧光,再通过高灵敏度的光度检测系统测量荧光的强度,从而实现对微量目标物的精确定量分析。
显微荧光定位
利用显微镜的高分辨率光学系统,将特定波长的激发光精确聚焦到样本的微观区域(如细胞器),激发荧光标记物(如荧光染料、荧光抗体或天然荧光物质)发射荧光。该技术能实现空间定位检测,适用于活细胞或固定样本。
光度定量分析
通过光电倍增管(PMT)或CCD探测器测量发射荧光的强度,结合标准曲线或参比物质,计算出目标物的绝对浓度或相对活性。灵敏度可达(10^{-18})摩尔级别,适用于酶活性、离子浓度(如(Ca^{2+}))、基因表达等研究。
核心应用领域
高灵敏度(检测限低)、空间分辨率(微米级)、可实时动态监测活样本。
需精密光学校准,易受背景荧光干扰;样本制备要求高(如荧光标记效率影响准确性)。
Herman, B. (1998). Fluorescence Microscopy. 2nd ed. Springer. (显微荧光技术基础)
Lipp, P. et al. (2000). "Microfluorophotometry of intracellular Ca²⁺ in cardiac myocytes." Journal of Physiology. (心肌细胞钙离子测定)
Inoué, S. (2006). "Foundations of confocal microfluorophotometry." Methods in Cell Biology. (共聚焦显微荧光光度法优化)
注:文献来源为经典学术著作与期刊,链接因平台限制未提供,可通过DOI在学术数据库(如PubMed、Google Scholar)检索原文。
microfluorophotometry 是结合显微技术、荧光检测和光度测定的分析方法,主要用于定量检测微小样本(如细胞、组织)中的荧光物质。以下是详细解释:
通过显微镜观察样本,利用特定波长的光激发荧光物质,再通过光电检测器测量发射光的强度,从而定量分析目标物质的浓度或分布。例如,在生物学中可用于检测细胞内的DNA、蛋白质或特定标记物。
如需进一步了解技术细节或案例,可参考相关文献或专业仪器说明。
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