
【化】 spectrophotometry
cent; dispart; distribute; divide; marking; minute
【计】 M
【医】 deci-; Div.; divi-divi
light; ray; honour; merely; naked; scenery; smooth
【化】 light
【医】 light; phot-; photo-
photometry
分光光度测定(Spectrophotometry)是一种基于物质对特定波长光的吸收特性进行定量或定性分析的仪器分析方法。该方法通过测量样品溶液对单色光的吸光度(Absorbance),依据朗伯-比尔定律(Lambert-Beer's Law)计算待测物质的浓度或含量。
物质分子吸收特定波长的光时发生能级跃迁,吸光度(A)与溶液浓度(c)及光程长度(l)成正比,公式为:
$$
A = varepsilon cdot c cdot l
$$
其中(varepsilon) 为摩尔吸光系数,是物质的特征常数。该定律成立需满足单色光、稀溶液及无化学反应等条件。
优势:灵敏度高(检出限达(10^{-6} text{mol/L}))、操作快捷、设备普及。
局限:需透明溶液、干扰物可能影响准确性、仅适用于吸光物质。
参考来源:
分光光度测定是一种基于物质对光的选择性吸收特性进行分析的方法,主要用于物质的定性和定量检测。以下从原理、特点和应用三方面进行综合说明:
光吸收定律
其理论基础是朗伯-比尔定律,即吸光度(A)与溶液浓度(c)和光程长度(l)成正比,公式为:
$$
A = varepsilon cdot c cdot l
$$
其中ε为摩尔吸光系数,反映物质对特定波长光的吸收能力。
选择性吸收特性
不同物质因分子结构差异,会吸收特定波长的光,形成特征吸收光谱。例如紫外区(200-400nm)、可见光区(400-760nm)、红外区(2.5-25μm)对应不同分析需求。
高灵敏度与精度
可检测微量物质(低至10^-6~10^-7 g/mL),单色光纯度更高(半宽5-10nm),相比传统比色法误差更小。
广泛适用性
不仅适用于有色溶液,还能通过紫外/红外区分析无色物质(如核酸、蛋白质)。
多组分同时分析
利用吸光度加和性,可在特定条件下实现混合溶液中多种成分的同步测定。
生物化学
检测蛋白质浓度(如BCA法)、酶活性、核酸纯度等。
环境监测
分析水体中的重金属离子(如铅、汞)及有机污染物含量。
工业与材料科学
测定染料浓度、金属离子配位结构,或通过红外分光光度法研究材料分子振动特性。
仪器类型:常用紫外-可见分光光度计、原子吸收分光光度计等,通过棱镜或光栅分光系统获得高纯度单色光。
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