
【化】 pulsed-field gel electrophoresis
脉冲凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,简称PFGE)是一种用于分离大分子量DNA片段的高分辨率电泳技术。与传统凝胶电泳不同,其核心原理是通过周期性变换电场方向,迫使DNA分子在琼脂糖凝胶中不断调整迁移路径,从而有效分离长度超过50 kb的超大DNA片段。该技术由Schwartz和Cantor于1984年首次提出,现已成为分子生物学和微生物学领域的重要分析工具。
PFGE采用交替正交电场系统,当电场方向改变时,DNA分子需重新定向才能继续迁移。由于大片段DNA的重新定向速度较慢,不同大小的片段在凝胶中呈现差异化的迁移速率,最终形成可分辨的条带。此方法突破了常规电泳对DNA片段大小的分离极限(通常为20-30 kb),可解析高达10 Mb的染色体DNA。
PFGE的分辨率可达同源菌株间1-3个遗传事件差异,其重复性符合美国疾病控制与预防中心(CDC)的分子分型标准化要求。通过优化脉冲时间、电压梯度等参数,可针对不同样本类型(如革兰氏阳性菌/阴性菌)实现特异性分离。
脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE)是一种用于分离大分子DNA或染色体的电泳技术,其核心在于通过周期性改变电场方向实现高效分离。以下从定义、原理、特点和应用四方面详细解释:
PFGE是传统凝胶电泳的改进技术,主要用于分离10kb至10Mb范围的大分子DNA或染色体。与传统单向电场不同,PFGE通过交替变换电场方向(通常有一定夹角而非完全相反)使DNA分子在凝胶中多次调整迁移路径,从而提升分辨率。
迁移速率((v))与电场强度((E))的关系可表示为: $$ v = mu E $$ 其中,(mu)为迁移率,与分子大小和凝胶孔径相关。在PFGE中,脉冲时间(t)对分离效果的影响可通过经验公式优化,例如: $$ t = k cdot log(L) $$ ((L)为DNA长度,(k)为经验常数)
如需进一步了解操作步骤或具体案例,可参考、5、8的详细实验流程。
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