
【機】 affinity precipitation
benignity; for oneself; parent; relative
and; draw; gentle; kind; mild; harmonious; mix with; sum; summation
together with
【計】 ampersand
【醫】 c.; cum
【化】 precipitation method
親和性沉澱法(Affinity Precipitation)是一種利用生物分子間特異性識别與結合能力來實現目标物質選擇性分離純化的生化分離技術。其核心在于通過設計特定的親和配體(如抗體、凝集素、酶底物類似物等)與目标分子(如蛋白質、酶、抗原)發生高特異性、可逆的結合,再通過改變環境條件(如pH、溫度、離子強度)誘導複合物沉澱,最終實現目标物的分離與回收。以下從原理、特點和應用角度詳細說明:
特異性識别
親和配體(Ligand)通過共價鍵固定在可溶性聚合物載體(如聚電解質或智能聚合物)上,形成親和載體。該載體能特異性識别并結合溶液中的目标生物分子(如抗原-抗體、酶-抑制劑、糖蛋白-凝集素)。
英文對照:Specific recognition - The affinity ligand (e.g., antibody, lectin) immobilized on a soluble polymer carrier binds selectively to the target biomolecule via biological affinity (e.g., antigen-antibody interaction).
誘導沉澱
通過調節環境參數(如升溫或改變pH),使親和載體-目标分子複合物發生相分離并沉澱。常用智能聚合物(如聚N-異丙基丙烯酰胺)在臨界溫度以上會由親水性轉為疏水性而聚集沉澱。
英文對照:Precipitation induction - Environmental triggers (temperature/pH shift) cause the polymer-bound complex to aggregate and precipitate.
解離與回收
沉澱物經洗滌後,通過調節緩沖液條件(如低pH、高離子強度)解離目标分子與配體,離心分離即可獲得純化的目标物。
英文對照:Dissociation and recovery - Target molecules are released from the ligand by altering buffer conditions and collected via centrifugation.
依賴生物親和力,可分離複雜混合物中低濃度的目标物(如酶抑制劑純化效率達90%以上)。
無需固相載體裝柱,省去傳統親和色譜的柱平衡、清洗步驟,適用于大規模分離。
親和聚合物可回收再生,降低生産成本(如智能聚合物可重複使用5次以上)。
單克隆抗體、重組蛋白的分離,如利用Protein A修飾聚合物純化IgG抗體。
胰蛋白酶抑制劑從大豆粗提液中一步沉澱純化。
快速富集血清中的疾病标志物(如癌胚抗原)用于檢測。
中文術語 | 英文術語 |
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親和性沉澱法 | Affinity Precipitation |
智能聚合物 | Smart Polymer |
配體-目标物複合物 | Ligand-Target Complex |
相分離 | Phase Separation |
參考文獻
親和性沉澱法是一種結合生物特異性親和相互作用與沉澱分離的技術,主要用于蛋白質等生物大分子的高效純化。以下從定義、機理、優點三方面詳細解釋:
1. 定義 親和性沉澱法(Affinity Precipitation)屬于生物分離技術,其核心是利用目标分子(如蛋白質)與配基(如抗體、酶底物)之間的特異性結合作用,形成複合物後通過沉澱實現分離。例如,抗原-抗體的專一性結合後形成不溶性沉澱物。
2. 作用機理
3. 技術優勢
補充說明:該方法與普通沉澱法(如鹽析法、等電點沉澱)的關鍵區别在于引入了生物特異性識别,顯著提高了選擇性。
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