
【机】 affinity precipitation
benignity; for oneself; parent; relative
and; draw; gentle; kind; mild; harmonious; mix with; sum; summation
together with
【计】 ampersand
【医】 c.; cum
【化】 precipitation method
亲和性沉淀法(Affinity Precipitation)是一种利用生物分子间特异性识别与结合能力来实现目标物质选择性分离纯化的生化分离技术。其核心在于通过设计特定的亲和配体(如抗体、凝集素、酶底物类似物等)与目标分子(如蛋白质、酶、抗原)发生高特异性、可逆的结合,再通过改变环境条件(如pH、温度、离子强度)诱导复合物沉淀,最终实现目标物的分离与回收。以下从原理、特点和应用角度详细说明:
特异性识别
亲和配体(Ligand)通过共价键固定在可溶性聚合物载体(如聚电解质或智能聚合物)上,形成亲和载体。该载体能特异性识别并结合溶液中的目标生物分子(如抗原-抗体、酶-抑制剂、糖蛋白-凝集素)。
英文对照:Specific recognition - The affinity ligand (e.g., antibody, lectin) immobilized on a soluble polymer carrier binds selectively to the target biomolecule via biological affinity (e.g., antigen-antibody interaction).
诱导沉淀
通过调节环境参数(如升温或改变pH),使亲和载体-目标分子复合物发生相分离并沉淀。常用智能聚合物(如聚N-异丙基丙烯酰胺)在临界温度以上会由亲水性转为疏水性而聚集沉淀。
英文对照:Precipitation induction - Environmental triggers (temperature/pH shift) cause the polymer-bound complex to aggregate and precipitate.
解离与回收
沉淀物经洗涤后,通过调节缓冲液条件(如低pH、高离子强度)解离目标分子与配体,离心分离即可获得纯化的目标物。
英文对照:Dissociation and recovery - Target molecules are released from the ligand by altering buffer conditions and collected via centrifugation.
依赖生物亲和力,可分离复杂混合物中低浓度的目标物(如酶抑制剂纯化效率达90%以上)。
无需固相载体装柱,省去传统亲和色谱的柱平衡、清洗步骤,适用于大规模分离。
亲和聚合物可回收再生,降低生产成本(如智能聚合物可重复使用5次以上)。
单克隆抗体、重组蛋白的分离,如利用Protein A修饰聚合物纯化IgG抗体。
胰蛋白酶抑制剂从大豆粗提液中一步沉淀纯化。
快速富集血清中的疾病标志物(如癌胚抗原)用于检测。
中文术语 | 英文术语 |
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亲和性沉淀法 | Affinity Precipitation |
智能聚合物 | Smart Polymer |
配体-目标物复合物 | Ligand-Target Complex |
相分离 | Phase Separation |
参考文献
亲和性沉淀法是一种结合生物特异性亲和相互作用与沉淀分离的技术,主要用于蛋白质等生物大分子的高效纯化。以下从定义、机理、优点三方面详细解释:
1. 定义 亲和性沉淀法(Affinity Precipitation)属于生物分离技术,其核心是利用目标分子(如蛋白质)与配基(如抗体、酶底物)之间的特异性结合作用,形成复合物后通过沉淀实现分离。例如,抗原-抗体的专一性结合后形成不溶性沉淀物。
2. 作用机理
3. 技术优势
补充说明:该方法与普通沉淀法(如盐析法、等电点沉淀)的关键区别在于引入了生物特异性识别,显著提高了选择性。
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