
【機】 Edman degradation technique
埃德曼降解技術(Edman Degradation)是一種用于測定蛋白質或多肽鍊N端氨基酸序列的經典化學方法,由瑞典生物化學家佩爾·埃德曼(Pehr Edman)于1950年首次提出。其英文術語為"Edman Degradation Technique",核心原理是通過逐步切解并鑒定蛋白質鍊末端的氨基酸,從而确定序列信息。
該方法廣泛應用于蛋白質組學研究,尤其在抗體工程、疾病标志物發現及酶功能分析中發揮重要作用。例如,早期胰島素結構的解析即依賴于該技術(參考《Journal of Biological Chemistry》1956年刊載的裡程碑研究)。
埃德曼降解對樣品純度要求高,且單次反應僅能解析約30-60個氨基酸殘基,因此逐漸被高通量質譜技術替代,但仍被視為驗證短肽序列的“金标準”(《Nature Methods》評述)。
權威文獻可參考美國國家生物技術信息中心(NCBI)蛋白質數據庫及《生物化學與分子生物學百科全書》(Encyclopedia of Biochemistry and Molecular Biology)。
埃德曼降解技術(Edman Degradation)是一種用于測定蛋白質或多肽N端氨基酸序列的經典化學方法,由Pehr Edman于1950年提出。其核心原理是通過循環反應逐一切除并鑒定N端氨基酸,從而獲得序列信息。以下為具體解析:
該方法利用異硫氰酸苯酯(PITC)與多肽鍊N端遊離α-氨基的化學反應,逐輪切斷并識别氨基酸殘基。每輪反應僅作用于N端,剩餘肽鍊進入下一循環,直至測序完成。
耦聯(Coupling)
在堿性環境(pH 8.0-9.0)中,PITC與N端α-氨基結合,形成苯氨基硫代甲酰胺(PTC)衍生物。
環化裂解(Cyclization and Cleavage)
強酸(如三氟乙酸)作用下,PTC衍生物環化,切斷第一個肽鍵,生成噻唑啉酮苯胺(ATZ)衍生物,同時釋放縮短的肽鍊。
萃取與轉化(Extraction and Conversion)
ATZ衍生物被有機溶劑萃取後,在酸性條件下轉化為穩定的苯基乙内酰硫脲(PTH-氨基酸),通過HPLC或電泳進行鑒定。
循環重複
剩餘肽鍊進入下一輪反應,直至測序完成(通常可測定30-60個氨基酸)。
優勢
局限性
主要用于蛋白質N端測序、合成多肽驗證、蛋白質翻譯後修飾研究等。現代自動化設備(如島津PPSQ)已實現高通量分析。
如需更詳細操作流程或案例分析,(搜狗百科)或(原創力文檔)。
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