western blotting是什麼意思，western blotting的意思翻譯、用法、同義詞、例句

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Western Blotting（蛋白質免疫印迹）是一種廣泛應用于分子生物學、生物化學和醫學研究中的實驗技術，主要用于檢測複雜生物樣品（如細胞或組織裂解液）中特定蛋白質的表達水平、分子量大小及翻譯後修飾狀态。其名稱源于發明者George Stark團隊對Edwin Southern（DNA印迹法發明者）的緻敬，與Southern Blotting（DNA檢測）對應，後衍生出Northern Blotting（RNA檢測）。

實驗原理與步驟：

1. 蛋白質電泳分離（SDS-PAGE）

   樣品經變性處理（加入SDS和還原劑）後，在聚丙烯酰胺凝膠電場中按分子量大小分離。

2. 轉膜（Blotting）

   将凝膠中分離的蛋白質轉移（印迹）到固相支持膜（常用硝酸纖維素膜或PVDF膜）上，便于後續檢測。

3. 封閉（Blocking）

   用非特異性蛋白（如牛血清白蛋白BSA或脫脂牛奶）封閉膜上未結合位點，減少抗體非特異性結合。

4. 一抗孵育（Primary Antibody Incubation）

   加入針對目标蛋白的特異性一抗，與膜上靶蛋白結合。

5. 二抗孵育（Secondary Antibody Incubation）

   加入标記酶（如辣根過氧化物酶HRP）或熒光基團的二抗，二抗可特異性識别一抗。

6. 信號檢測（Detection）

   通過化學發光（酶催化底物發光）、熒光成像或顯色法，可視化目标蛋白條帶位置及強度。

核心應用場景：

• 目标蛋白定性/定量分析：驗證基因過表達或敲除效果，如檢測疾病标志物表達。
• 分子量确認：通過與标準品對比，判斷蛋白是否發生剪切或修飾。
• 翻譯後修飾研究：結合磷酸化、泛素化等修飾特異性抗體，分析蛋白修飾狀态。
• 診斷工具：臨床用于檢測病原體抗體（如HIV、萊姆病）或自身免疫性疾病标志物。

技術優勢與局限：

優勢在于特異性高（依賴抗體質量）、可半定量分析；局限包括操作耗時、需優化條件（如抗體濃度）且對低豐度蛋白靈敏度有限（需高表達樣品或預富集）。

權威參考文獻來源：

1. 《Nature Protocols》技術指南

   Western blotting: Sample preparation to detection（詳細标準化流程）

2. 《Cold Spring Harbor Protocols》方法學

   Western Blotting Technique（經典操作規範）

3. 美國國立衛生研究院（NIH）技術手冊

   Principles of Western Blotting（原理與故障排除）

4. 《Journal of Visualized Experiments》視頻實驗方案

   Step-by-Step Western Blot Analysis（可視化操作演示）

網絡擴展資料

Western blotting（蛋白質印迹法）是一種廣泛應用于分子生物學和生物化學領域的實驗技術，主要用于檢測和分析特定蛋白質的表達及特性。以下為詳細解釋：

1.定義與原理

Western blotting通過抗原-抗體特異性結合的原理檢測目标蛋白。其核心步驟包括：

• 電泳分離：利用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）按分子量分離蛋白質混合物。
• 轉膜：将分離後的蛋白質轉移到固相載體（如硝酸纖維素膜或PVDF膜）上。
• 抗體檢測：依次使用一抗（特異性結合目标蛋白）和标記的二抗（如酶标抗體），通過化學發光或顯色反應實現可視化檢測。

2.主要應用

• 蛋白質表達分析：檢測特定蛋白質在細胞或組織中的表達水平。
• 翻譯後修飾研究：如磷酸化、糖基化等修飾的檢測。
• 抗體驗證：确認抗體的特異性及效價。
• 疾病研究：用于癌症、神經退行性疾病等病理機制中标志蛋白的鑒定。

3.操作流程

典型步驟包括：

1. 樣品制備：提取蛋白質并定量；
2. 電泳分離：按分子量分離蛋白質；
3. 轉膜：将蛋白質轉移至膜載體；
4. 封閉：使用脫脂奶粉或BSA封閉非特異性結合位點；
5. 抗體孵育：一抗結合目标蛋白，二抗結合一抗；
6. 顯色/成像：通過化學發光或染色法分析結果。

4.與其他技術的區别

• Southern blotting：檢測DNA，使用DNA探針。
• Northern blotting：檢測RNA，使用RNA探針。
• Western blotting：唯一針對蛋白質的技術，依賴抗體探針。

5.曆史背景

該技術于1979年由George提出，現已成為蛋白質研究的标準方法之一。

提示：如需更詳細的實驗指南，可參考權威資料如Takara的《Western Blotting實驗操作指南》。

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